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3分鐘學(xué)會(huì )電泳轉移緩沖液的使用方法

更新時(shí)間:2023-04-15   點(diǎn)擊次數:968次
  電泳轉移緩沖液是一種運用于分子生物學(xué)研究中電泳技術(shù)的重要試劑。電泳轉移緩沖液的功能是在電泳結束后將凝膠中分離的帶狀DNA、RNA、蛋白質(zhì)等生物分子轉移到光滑的硬膜上,以便后續的檢測、識別、定量等工作。
 
  電泳轉移緩沖液的使用方法,一般包括以下幾個(gè)環(huán)節:
 
  1、準備光滑硬膜
 
  在開(kāi)始轉移之前,需要將需要轉移的生物分子的質(zhì)量標準分離帶通過(guò)電泳移至凝膠中央,在這之后,需要準備一塊光滑的硬膜來(lái)接收分離的帶狀分子。硬膜的材質(zhì)一般是聚氟乙烯、聚丙烯或硅膠等。
 
  2、泡制電泳緩沖液
 
  根據特定的樣品,需要選擇特殊的電泳緩沖液,可分為常用的轉移緩沖液和蛋白質(zhì)轉移緩沖液兩種。常規轉移緩沖液的一般組成為甲酸(0.06M)和Tris-蛋白酸(0.025M),pH值調節至8.3左右。蛋白質(zhì)轉移緩沖液的組成也不同,其中包括引物、脯氨酸和甘氨酸等。在制備電泳緩沖液時(shí),一般需要將其溶解于水中,并將pH值調整到的水平。
 
  3、組裝電泳轉移單元
 
  在電泳轉移之前,需要將制備的硬膜放置在電泳轉移單元的陽(yáng)極側。在陽(yáng)極側的上面,可以擺放吸水毛細管,在電泳緩沖液池的頂部也需要安裝帶濾紙的離子加工盒子。在開(kāi)始時(shí),先在離子加工盒子、水毛細管和硬膜之間放置吸水紙和濾紙,以防止在生物分子傳輸中產(chǎn)生空氣泡。
 
  4、開(kāi)始轉移
 
  在準備好電泳轉移單元之后,需要將調節pH值的電泳緩沖液盛放于電泳池中。之后,將已切割的凝膠貼上硬膜,然后將其壓至硬膜表面。在準備好凝膠的條件之下,將準備好的凝膠一起懸掛于已裝載了溶液的鉑絡(luò )合物緩沖池中。隨著(zhù)負極電流流過(guò),生物分子帶將逐漸遷移到硬膜上。轉移時(shí)間一般根據具體的生物分子質(zhì)量確定,通常設置在半小時(shí)至數小時(shí)之間。
 
  5、染色和檢測
 
  經(jīng)過(guò)電泳轉移和硬膜固定后,需要進(jìn)一步處理并檢測生物分子的表現情況。染色一般使用銀染、Coomassie藍染色或卡羅林鈷染色等方法。之后,使用熒光探針、放射性探針或酶標記法等技術(shù)進(jìn)行檢測。
 

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